DdNTP колдонуунун максаты эмне?
DdNTP колдонуунун максаты эмне?

Video: DdNTP колдонуунун максаты эмне?

Video: DdNTP колдонуунун максаты эмне?
Video: Путиндин максаты эмне? 2024, Ноябрь
Anonim

DdNTP билдирет Дидеоксинуклеотиддер Трифосфаттар Сэнгердин дидеокси методунда ДНК секвенирлөө үчүн ДНК тилкелеринин ар кандай узундугун өндүрүү үчүн колдонулат. Бул ДНКнын полимеризациясы (же ДНКнын элонгациясы) процессинин токтотулушуна алып келет, анткени бул процессти улантуу үчүн 3'-OH тобу керек.

Ошондуктан, эмне үчүн ddNTPs секвенирлөөдө колдонулат?

Дидеоксинуклеотиддер ДНК полимеразанын чынжырды узартуучу ингибиторлору, колдонулган ДНК үчүн Сэнгер ыкмасы менен ырааттуулук . Дидезоксирибонуклеотиддерде 3' гидроксил тобу жок, демек, бул дидеоксинуклеотид чынжырда болгондон кийин чынжырдын андан ары узартылышы мүмкүн эмес. Бул ДНКнын бүтүшүнө алып келиши мүмкүн ырааттуулугу.

Ошо сыяктуу эле, ddNTPs dNTPs тиркелет? Бир же бир нече dNTPs репликация продуктуларын визуалдаштырууга жардам берүү үчүн радиоактивдүү этикеткаланган. Акыр-аягы, ар бир түтүк деп аталган төрт өзгөчө нуклеотиддердин бирин алат дидеоксинуклеотиддер ( ddNTPs ). Бирок, ДНК полимераза кошулгандан кийин чынжырды андан ары узарта албайт, анткени ага 3'-OH керек. тиркөө кийинки нуклеотидге.

Ошо сыяктуу эле, ddNTPs секвенирлөө реакциясын кантип токтотот?

аз өлчөмдө бар болгондо реакцияларды иреттөө дидезоксирибонуклеозид трифосфаттары ( ddNTPs ) токтотуу секвенирлөө реакциясы өсүп жаткан ДНК тилкелеринде ар кандай позицияларда. ddNTPs секвенирлөө реакциясын токтотот анткени алар: ДНК-полимеразаны шаблон жиптен түшүп кетишине алып келет. в.

Дидеоксинуклеотиддерди камтыган кандай техника колдонулушу мүмкүн?

Сэнгер секвенциясы – а ыкма чынжырды токтотуунун тандалма кошулуусуна негизделген ДНК тизмегинин дидеоксинуклеотиддер in vitro ДНК репликациясы учурунда ДНК полимераза менен. 1977-жылы Фредерик Сэнгер жана анын кесиптештери тарабынан иштелип чыккан, ал эң кеңири таралган колдонулган ырааттуулук ыкма болжол менен 40 жыл бою.

Сунушталууда: