Мазмуну:

Эмне үчүн секвенирлөөдөн мурун ПЦР продуктуларын тазалоо керек?
Эмне үчүн секвенирлөөдөн мурун ПЦР продуктуларын тазалоо керек?

Video: Эмне үчүн секвенирлөөдөн мурун ПЦР продуктуларын тазалоо керек?

Video: Эмне үчүн секвенирлөөдөн мурун ПЦР продуктуларын тазалоо керек?
Video: Атоми Ивнинг Кеар набор 2024, Май
Anonim

каалаган текшерүү продукт болуп саналат маанилүү , конкреттүү эмес жоктугун ырастоо кирет буюмдар жана праймер димерлери. Таза Реакция аралашмасы да болот зарыл кийинки реакцияларга тоскоол боло турган жана окулбай турган ырааттуулукка алып келиши мүмкүн болгон корпорацияланбаган праймерлерди жана dNTPдерди алып салуу.

Мындан тышкары, эмне үчүн ПЦР продуктуларын тазалоо керек?

Сиз керек ПЦР продуктуларын тазалоо байлоонун ийгилигин оптималдаштыруу үчүн пайдаланылбаган праймерлерден, нуклеотиддерден жана ферменттерден арылуу үчүн продукт нын ПЦР . үчүн тазалоо the ПЦР продуктулары , өлчөмдү алып салуу хроматографиясы колдонулат.

Ошондой эле суралышы мүмкүн, сиз чектөө эндонуклеаза сиңирүү алдында ПЦР продуктуларын тазалоо керекпи? Көпчүлүгү чектөө ферменттер активдүү ПЦР буферлер. Клондоо колдонмолору үчүн, тазалоо нын сиңирүү алдында ПЦР продуктулары болуп саналат зарыл активдүү термофилдик ДНК полимеразаны жок кылуу үчүн ПЦР аралашма. ДНК полимеразалар бөлүнгөн ДНКнын учтарын өзгөртүп, лигациянын түшүмүн азайтышы мүмкүн.

Адамдар дагы сурашат, сиз ПЦР продуктуларын секвенирлөө үчүн кантип даярдайсыз?

ПЦР продуктуларынын түз ырааттуулугу

  1. Туура фрагментти күчөткөнүңүзгө КАРАҢЫЗ.
  2. Бардык калдык ПТР праймерлерин жана корпорацияланбаган нуклеотиддерди алып салышыңыз керек.
  3. Эгерде ПТР праймерлери секвенирлөөчү праймер(лер) болсо, алар биздин шарттарга дал келгенин текшериңиз.
  4. Үлгүнү ашыкча топтобоңуз!

Сиз ПЦР продуктуну иреттей аласызбы?

Түз Секвенциялоо нын ПЦР продуктулары . Секвенциялоо гана колдонот бир колдонулган экөөнүн ордуна праймер ПЦР . Эгерде сен кылсаң эки праймерди алып салбаңыз, сен кыласың эки алуу ырааттуулугу окууга мүмкүн эмес, бири-бирине үстөм. а колдонуу туура болот ПЦР үчүн праймер секвенирлөө ал биздин шарттарга туура келсе.

Сунушталууда: