Мазмуну:

Плазмидага генди кантип киргизүү керек?
Плазмидага генди кантип киргизүү керек?

Video: Плазмидага генди кантип киргизүү керек?

Video: Плазмидага генди кантип киргизүү керек?
Video: Кантип тестти туура жана оңой иштесе болот? 2024, Ноябрь
Anonim

Негизги кадамдар болуп төмөнкүлөр саналат:

  1. Кесип ачыңыз плазмид жана "чаптоо" ген . Бул процесс чектөө ферменттерине (ДНКны кесүүчү) жана ДНК лигазасына (ДНКга кошулган) таянат.
  2. Кыстаруу the плазмидге кирет бактериялар.
  3. Көп өсө бер плазмид -бактерияларды алып жүрүшөт жана аларды протеинди жасоо үчүн «фабрика» катары колдонушат.

Ошондой эле, генди GCSE плазмидине кантип киргизүүгө болот?

бул плазмидага киргизилет лигаза ферменттерин колдонуу. the плазмид барат ичине бактериялык клетка. трансгендик бактерия көбөйөт, натыйжада ичинде адамдын инсулинин өндүрүүчү миллиондогон окшош бактериялар.

Андан тышкары, генди кантип субклондойсуз? үчүн негизги кадамдар Субклондоо Сиз инсертиңизди ата-энелик вектордон бошотуп, тазалайсыз, бул векторду даярдалган көздөгөн векторго байлайсыз, бул лигация реакциясын компетенттүү бактериялык клеткаларга айлантасыз. Андан кийин кыстаруу үчүн трансформацияланган клеткаларды экрандан өткөрөсүз.

Муну эске алып, ген клондоштуруунун 4 кадамы кандай?

Классикалык чектөө ферменттерин сиңирүү жана ligation клондоо протоколдорунда кандайдыр бир ДНК фрагментин клондоо негизинен төрт кадамды камтыйт:

  • кызыктырган ДНКны изоляциялоо (же максаттуу ДНК),
  • байлоо,
  • трансфекция (же трансформация) жана.
  • текшерүү/тандоо процедурасы.

Плазмидди кантип күчөтөсүз?

Эксперименттик процедура

  1. ПТРди иштетиңиз жана ПТР продуктуну тазалаңыз: Кыстаруу ДНКңызды күчөтүү үчүн ПТРди иштетиңиз.
  2. ДНКңызды сиңирүү:
  3. Гель менен тазалоо аркылуу векторуңузду жана векторуңузду изоляциялаңыз:
  4. Кыстармаңызды векторуңузга байлаңыз:
  5. Трансформация:
  6. Даяр плазмидди изоляциялоо:
  7. Плазмидиңизди секвенирлөө аркылуу текшериңиз:

Сунушталууда: